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肉毒梭菌（Clostridiumbotulinum）于1897年在比利時一次食物中毒事件中由vanErmengen首先分離出。菌體長2～4μm、寬0.5～2μm，菌體有4～8根鞭毛，能運動，無莢膜，在厭氧環(huán)境中生長，容易形成芽孢。幼齡菌體革蘭染色陽性，形成芽孢后的老齡菌體為陰性。本菌廣泛存在自然界中，以芽孢形式存在土壤、蔬菜、水果、谷物中，亦可存在于動物糞便中。

1、病原學檢查 ：將可疑食物、嘔吐物或排泄物加熱煮沸20min后，接種血瓊脂作厭氧菌培養(yǎng)，檢出致病菌。對創(chuàng)傷型肉毒中毒，在血清中找到毒素或從傷口處分離并在厭氧條件下培養(yǎng)出肉毒桿菌可明確診斷。嬰兒型肉毒中毒需與膿毒癥，先天性肌營養(yǎng)不良，脊柱肌肉萎縮，甲狀腺功能減退及良性先天性肌張力減低相鑒別。在糞便中找到肉毒毒素或該菌可確診。

2、毒素試驗

（1）動物試驗：將檢查標本浸出液飼喂動物，或作豚鼠、小白鼠腹腔內(nèi)注射，同時設對照組，以加熱80℃ 30min處理的標本或加注混合型肉毒抗毒素于標本中，如試驗組動物發(fā)生肢體麻痹死亡，而對照組無，則本病的診斷即可成立。

（2）中和試驗：將各型抗毒素血清0.5ml注射小白鼠腹腔內(nèi)，隨后接種標本0.5ml，同時設對照組，從而判斷毒素和定型。

（3）禽眼接種試驗：將含有毒素的浸出液，視禽類大小，采用0.1～0.3ml不等注入家禽眼內(nèi)角下方眼瞼皮下，出現(xiàn)眼瞼閉合，或出現(xiàn)麻痹性癱瘓和呼吸困難，經(jīng)數(shù)十分鐘至數(shù)小時死亡，可作為快速診斷。

3、肌電圖檢查： 有肌纖維顫動，單次刺激反應降低，多次反復刺激電勢反而增高，有短持續(xù)期小波幅多相運動、電勢增加等特點，有助于本病診斷。